單克隆抗體和多克隆抗體的用途及選擇要點

一、單克隆抗體和多克隆抗體的用途：

1、定義多克隆抗體和單克隆抗體有用性的兩個關鍵特征涉及它們各自對抗原的特異性和靈敏度。

2、抗體的特異性是由其結合域和目標抗原之間的相對親和力決定的，而其他分子是存在的。對這種特異性的利用對免疫學研究人員和臨床醫生來說是至關重要的，因為許多應用都是利用多克隆和/或單克隆抗體來專門檢測目標分子。結合抗原特異性，抗體的靈敏度是一個重要的參數，決定了它在實驗室的實用性。

3、高靈敏度的抗體非常適用于診斷應用，如免疫沉淀、West Blot 和酶聯免疫吸附試驗（ELISA），因為它們能夠識別低水平的目標抗原。

免疫沉淀是一種分析技術，通過使用特異性結合抗原的抗體將抗原從混合物中分離出來。然后用固定化抗體或磁珠對產生的抗原-抗體復合物進行進一步處理，從而使抗原-抗體復合物在分析前從混合物中分離出來。

4、與免疫沉淀法一樣，ELISA 可以使用多克隆或單克隆抗體來檢測溶液中的目標抗原。

5、間接和夾心 ELISA 是兩種免疫測定形式，在整個過程中使用兩種類型的抗體：單克隆抗體由于對目標抗原的高特異性，通常首先應用（一級）；多克隆抗體由于能夠以高靈敏度放大低信號，因此作為二級試劑更有用。

6、除了 ELISA，抗體對于免疫組化和流式細胞儀等檢測技術也很有用，因為它們可以以高分辨率檢測復雜組織或細胞內的抗體-抗原構建。

企業對抗體特異性和靈敏度的確認使得像 ELISAs 這樣的免疫測定可以根據抗原和抗體的使用方式而采取不同的形式，這使得這些測試具有高度的通用性。例如，一種免疫測定需要高度敏感的測試來檢測一種未知的病原體，由于多克隆抗體能夠識別一種抗原上的多個表位，因此會從多克隆抗體中獲益。如果一個病原體或抗原先前已經被定性，那么在下游應用中使用單克隆抗體來進一步定性可能更合適。

7、在實驗室外，抗體可以被用來增強、模仿或恢復免疫系統攻擊疾病目標的能力。除了一些例外，單克隆抗體比多克隆抗體更適合于治療目的，因為它們具有同質性，對單一表位的高特異性和低程度的交叉反應。8、這些特性對于有效的癌癥治療特別重要，因為腫瘤細胞能夠逃避或阻斷免疫系統。單克隆抗體療法對癌細胞發揮作用的一些方式包括涉及直接結合以誘導細胞死亡的機制和阻斷腫瘤生長因子和血液供應的間接機制。

二、單克隆抗體（. 一抗）和多克隆抗體（二抗）的選擇要點：

1. 一抗選擇要點

（1）確定抗體的名字，注意中英文名字、它名、亞型等信息。

（2）確定你的實驗類型，Elisa，WB，IHC，ICC，還是FACS。一般抗體的說明書都會列出該抗體經驗證過適用于何種實驗的類型，如果抗體說明 書沒有提及的應用類型，并不意味著該抗體不適用于此種分析應用類型，而僅是說明尚未經過此種實驗驗證，請根據說明書列出的已驗證的類型來選擇適合你實驗的 抗體。

（3）確定實驗樣本的種屬，Human，Mouse，還是Rat。一般抗體說明書都列出該抗體經試驗驗證過適用于何種物種實驗，請根據說明書列出已驗證的種屬來選擇適合你實驗的抗體。

（4）樣本蛋白的結構性質。了解樣本蛋白的結構性質有助于選擇最合適的抗體，待測樣本蛋白的結構域和樣本在提取和處理過程中是否會變性，蛋白空間構象的改變，會影響抗體的免疫親和反應。

（5）單多克隆抗體的選擇。市面上的抗體還是以多克隆抗體為主，一般單克隆抗體特異性強，但親和力相對小，檢測抗原靈敏度相對就低；而多克隆抗體特異性稍弱，但抗體的親和力強，靈敏度高，但易出現非特異性染色（可以通過封閉等避免）。

2. 二抗選擇要點

（1）種屬來源。主要根據一抗種屬來源來決定購買二抗來源，如一抗是小鼠來源，那二抗就買抗小鼠的即可（羊、兔等均可）。

（2）標記物的選擇。有HRP、Biotin、熒光素等標記物。一般SP三步法二抗選擇Biotin標記的二抗，以與后面的SP結合反應，而免疫熒光染色就需要購買不同熒光素標記的二抗，如羅丹明、FITC、Cy3等常用熒光素。